Corrección del 3er quiz 6 de noviembre

I) lo que esta en paréntesis no tenían que escribirlo, es explicación
1) En cada paso se debe cuantificar las proteínas por prueba de Biuret o xantoproteica o Lowry o Bradford. Hacer seguimiento de la purificación por electroforesis, determinar actividad enzimático
2) Tomar hojas jóvenes
3) romper células
4) separar detritos de citoplasma
5) tomar el citoplasma
6) hacer salting out a 50%, las globulinas precipitan mas o menos a esa saturación de sal
7) separar el precipitado
8) resuspender el precipitado en agua y limpiar por diálisis
9) realizar cromatografía del dializado (para purificar la proteína T ya que en el citoplasma pueden haber numerosas globulinas)
1. cromatografía de exclusión molecular (que separe ejemplo de 5000 a 20000Da)
2. cromatografía de intercambio iónico (pI 8)
3. cromatografía de afinidad (glucosidasa)
10) verificar pureza con electroforesis, determinar % de rendimiento y actividad de la enzima
II)
En la prueba de Bradford la cargas positivas de las proteínas se unen a las cargas negativas del colorante azul brillante de Coomassie. El colorante en solución es de color rojo y al unirse con las cargas positivas de las proteínas cambia a color azul.

III)
la prueba de Biuret determina enlaces peptídico por reacción en medio alcalino de iones de cobre con los nitrógenos de los enlaces peptídico. La prueba de Lowry es una modificación de la prueba de Biuret, en la que el producto de la prueba de Biuret (proteína-cobre) reduce el reactivo de folin, esto aumenta 100 veces la sensibilidad.

IV)
1)-una parte es reflejada
-otra parte es absorbida por las moléculas de la sustancia
-otra parte es transmitida a través de la solución
2) las moléculas en una solución de color violeta adsorben en la longitud de onda del color opuesto al violeta. El color opuesto del violeta es el naranja que tiene una longitud de onda de aproximadamente 600 a 650nm, en este rango se puede determinar la concentración de las moléculas en la solución violeta.

V)
Solución madre al 30% de albúmina bovina. curva de calibración con concentraciones (ejemplo) 2,3,5,7,10mg/l
1) convertir la concentración de 30% a mg/l
1000ml -100%
X 30%
X= (30% x 1000ml) / 100%
X = 300ml=300g en 1L = 300000mg/l
2) diluciones en serie
1ml de solución madre + 9ml de agua = dilución 1/10 concertación del tubo 30000mg/l
1ml de 1/10 + 9ml de agua = dilución 1/100 concentración del tubo 3000mg/l
1ml de 1/100 + 9ml de agua = dilución 1/1000 concentración del tubo 300mg/l
1ml de 1/1000 + 9ml de agua = dilución 1/10000 concertación del tubo 30mg/l

a partir del ultimo tubo se pueden hacer las patrones de la curva de calibración

V1 = (1ml x 10mg/l) / 30mg/l = 0.333ml + 0.667ml de agua

V1 = (1ml x 7mg/l) / 30mg/l = 0.233ml +0.767ml de agua

V1 = (1ml x 5mg/l) /30mg/l = 0.166ml +0.834ml de agua

V1 = (1ml x 3mg/l) / 30mg/l = 0.1ml +0.9ml de agua

V1 = (1ml x 2mg/l) /30mg/l = 0.066ml +0.934ml de agua